El día 25-02-11 se realizó el tercer intento de la fecundación in vitro en erizos y por primera vez conseguimos la fecundación y el desarrollo embrionario, llegando hasta la dudosa fase de larva pluteus. Este fue el procedimiento:
- Disponíamos de 10 ejemplares de erizos de mar bien maduros ( objetivo que nos planteamos en el anterior intento debido a que los gametos expulsados por los erizos de tamaño pequeño eran inmaduros) recogidos en las playas de Algeciras.
- De los 10 erizos solo nos hizo falta estimular a 3 de ellos, los cuales dos eran macho y uno hembra. La estimulación como se explica en el proyecto ha sido realizada inyectándole por la cara oral al erizo 0.5 ml de una disolución de KCl 0.5M. Posterior a la extracción de gametos mezclamos en un portaobjetos una gota de semen con 5 de agua y de igual manera con los óvulos para observarlos al microscopio y verificar su madurez.
Estimulación del erizo macho
Expulsión de los gametos
Semen de erizo mezclado con agua de mar
Espermatozoides al microscopio
Desovación del erizo hembra
Óvulos de erizo al microscopio
- Después de observar los gametos llevamos a cabo el proceso de fecundación, tomando tres muestras de óvulos y una de espermatozoides y mezclándolo todo en un vaso precipitado con 100 ml de agua de mar. A continuación sacamos una muestra para llevarla al microscopio y observar la fecundación, realizando fotografías y vídeos de este proceso. La fecundación será considerada el tiempo 0.
Espermatozoides alrededor del óvulo intentando fecundarlo.
- Después de la fecundación, a distintas horas fuimos tomando muestras de la preparación de óvulos fecundados para distinguir las distintas fases del desarrollo embrionario. Conseguimos distinguir claramente las fases de la segmentación, el estadio de blástula, la gastrulación y la gástrula. Sin embargo, no pudimos observar con claridad el estadio de larva pluteus, seguramente debido que las condiciones del agua de mar no eran aptas para que el embrión se desarrollara hasta ese estado. Aún así pudimos ver un embrión que es probable que se estuviera convirtiendo en la larva, aunque nos es del todo probable. Estas son las fotografías y sus correspondientes estados y horas:
SEGMENTACIÓN: 1ª DIVISIÓN ( DOS CÉLULAS)
1 hora
SEGMENTACIÓN: 2ª DIVISIÓN ( 4 CÉLULAS)
2.5 horas
SEGMENTACIÓN: 3ª DIVISIÓN ( 8 CÉLULAS)
3 - 3.5 horas
MÓRULAS EN DISTINTAS FASES DE LA SEGMENTACIÓN
3 horas
SEGMENTACIÓN: MÓRULA DE 16 CÉLULAS
5 horas
SEGMENTACIÓN: MÓRULA DE 32 CÉLULAS
20 horas
SEGMENTACIÓN: MÓRULA DE CERCA DE 60 CÉLULAS
1 día
BLÁSTULA
un día y medio
GASTRULACIÓN ( GÁSTRULA TEMPRANA)
2 días y medio
LARVA PLUTEUS
4 días
Resultados y conclusión: hemos conseguido el principal objetivo del proyecto, conseguir la fecundación y observar buena parte del desarrollo embrionario. Sin embargo, el estado de larva pluteus no se aprecia con claridad, por lo que volveremos a repetir el experimento, esta vez con un microscopio de más calidad y con unas mejores condiciones para que los embriones puedan llegar a la larva pluteus.
Animo y a por la larva!!!!!La profa.
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